大战绿妖之后，蜘蛛侠帕克（托比•马奎尔 Tobey Maguire 饰）忍痛拒绝了他仅有的挚爱玛丽（克尔斯滕•邓斯特 Kirsten Dunst 饰），由于蜘蛛侠的身份会为自己和亲人带来巨大风险，帕克决议独立承担起蜘蛛侠的职责。
帕克一向在忙于敷衍各种应战：学习超能力的灵活运用；在超级英豪与普通大学生的双重身份下躲藏自我、小心谨慎地日子等等。帕克对玛丽越来越难以自拔，可是作为蜘蛛侠又不能对玛丽随同心扉。
老友哈利由于误解蜘蛛侠而一向处处与其为刁难；仅有的亲人婶婶也对蜘蛛侠的实在身份产生了置疑。一起，新的应战又呈现了：凶恶而强壮的章鱼博士。帕克在种种压力下肩负起蜘蛛侠的任务。
